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    外泌體microRNA數字PCR檢測

    外泌體microRNA


           外泌體(Exosomes
    )廣泛分布于唾液、血漿、乳汁、尿液等體液中。它是具有脂質雙層膜結構的微小膜泡,大小為30-150nm左右。外泌體可以攜帶豐富的RNA、DNA、蛋白質等物質在細胞和組織之間自由穿梭,參與細胞間的通訊網絡。外泌體廣泛參與了機體免疫應答、抗原呈遞、細胞分化、腫瘤生長于侵襲等多種生物過程。


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    1 外泌體生物學過程示意圖



           研究發現外泌體中的核酸[1](microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等)
    含量和種類豐富,其中microRNA在外泌體總RNA含量占比超過40%[2](見圖2)。同時,由于microRNA具有廣泛的生物功能,并且具備良好的生物穩定性,因此成為目前廣泛研究的外泌體RNA類型[3-5]。


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    圖2 外泌體RNA分布

    外泌體microRNA的檢測技術


            常規生物學實驗中,實時定量PCR 技術(RT-PCR)廣泛用于microRNA的檢測實踐中,但外泌體樣品中的microRNA豐度極低,普通RT-PCR技術的靈敏度已經不能夠滿足。第三代
    微滴式數字PCR——ddPCR技術,成為外泌體microRNA檢測的首選技術。
            微滴式數字PCR(Droplet digital PCR),又成為“油包水PCR”,在傳統的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴,其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個至數個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后,逐個對每個微滴進行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度(見圖3)。微滴式數字PCR技術不佳有效提高了核酸分子的擴增效率,而且由于采用微滴計數的方法進行定量,可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值,對所測樣品中的核酸分子進行絕對定量。


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    圖3 ddPCR的工作流程


    數字PCR檢測服務


            華盈生物推出的微滴式數字PCR(ddPCR)檢測服務,特別適用于對外泌體miRNA為代表的低豐度RNA表達,以及微量樣品DNA突變的檢測分析。


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    圖4 微滴式數字PCR (ddPCR)平臺


    數字PCR平臺優勢


    更特異單分子水平擴增,稀有分子信號不會再被覆蓋
    更簡便
    –直接絕對定量,不再依賴擴增曲線、內參基因、標準品
    更靈敏
    –分辨率達0.001%,檢測樣本可達1ng
    更精確
    –不受擴增效率影響,通過終點信號計算濃度

    數字PCR 服務流程:



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    外泌體一站式服務


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            華盈生物圍繞外泌體研究,開發了一系列的試劑產品和服務項目:包括自主研發的EIQ3外泌體試劑盒、外泌體超速離心、外泌體Nano-sight(NTA)計數、外泌體透射電鏡拍攝、外泌體標志物蛋白鑒定、外泌體蛋白質譜分析、外泌體microRNA測序、外泌體microRNA芯片分析、外泌體核microRNA數字PCR檢測等。華盈生物“一站式”服務項目,可以滿足廣大科研用戶的多方位研究需求。
           業務垂詢:
    400-869-2936


    參考文獻


    1. Ibrahim A, Marbán E. Exosomes: Fundamental Biology and Roles in Cardiovascular Physiology [J]. Annual Review of Physiology, 2016, 78(1): 67-83.

    2. Huang Xiaoyi,Yuan Tiezheng,Liang Meihua et al. Exosomal miR-1290 and miR-375 as prognostic markers in castration-resistant prostate cancer.[J] .Eur. Urol., 2015, 67(1): 33-41.

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    5. Ferguson Scott W,Wang Jinli,Lee Christine J et al. The microRNA regulatory landscape of MSC-derived exosomes: a systems view.[J] .Sci Rep, 2018, 8(1): 1419.

    6. Melo Sonia A,Sugimoto Hikaru,O'Connell Joyce T et al. Cancer exosomes perform cell-independent microRNA biogenesis and promote tumorigenesis.[J] .Cancer Cell, 2014, 26(5): 707-21.