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    外泌體miRNA測序服務

    外泌體miRNA測序介紹

    外泌體(Exosomes)廣泛分布于唾液、血漿、乳汁、尿液等體液中。它是具有脂質雙層膜結構的微小膜泡,大小為30-150nm左右。外泌體可以攜帶豐富的RNA、DNA、蛋白質等物質在細胞和組織之間自由穿梭,參與細胞間的通訊網絡。外泌體廣泛參與了機體免疫應答、抗原呈遞、細胞分化、腫瘤生長于侵襲等多種生物過程。

    然而外泌體中的miRNA雖然種類較多,但其豐度并不高,對于微量樣本來說,在提取外泌體后就很難進行miRNA的廣泛篩選工作了?;谶@種研究的瓶頸問題,華盈生物引進了先進的UMI微量miRNA建庫方法,有效解決了外泌體中微量miRNA的測序篩選問題。同時,由于UMI獨特的技術原理,在核酸PCR放大過程中,不同樣本間UMI的比例與原始樣本RNA的含量始終保持一致,這樣就避免了核酸在PCR放大過程中產生的系統誤差,有效解決了外泌體miRNA測序篩選的系統問題。






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      圖1 外泌體生物學過程示意圖

     

    技術路線

    • 接頭連接:將預腺苷化的3’和5’接頭通過連接酶依次加到miRNA上。

    • cDNA合成:逆轉錄(RT)引物中包含UMI標簽序列。(RT)引物與3’接頭的一個區域結合,促使miRNA轉化為cDNA(每個miRNA分子分配到一個UMI)。

    • 文庫擴增:文庫擴增采用通用正向引物反向引物,產物經磁珠純化后用于質控分析與上機測序。

    • 建庫時在RT反應過程中引入UMI(Unique Molecular Indices)。

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                          圖2. UMI微量miRNA建庫原理

     

    服務流程

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    華盈生物優勢

    1、雙平臺外泌體制備

    華盈生物提供經典的超離方法以及試劑盒法,客戶可根據樣本情況合理選擇外泌體制備方法。

    2、外泌體鑒定全套服務

    在外泌體鑒定階段,華盈生物不僅可以提供經典的NTA分析,還可以提供外泌體透射電鏡拍攝、外泌體標志物蛋白Western Blot鑒定等。

    3、新型建庫測序技術

    在PCR擴增前,在所有的miRNA分子上加入分子條形碼(UMI),跟蹤原始樣本中初始的miRNA拷貝數,排除建庫擴增帶來的bias,準確還原樣本的原始狀態。

    4、起始量低

    QIASeq miRNA Library Kit可用于少量樣品中的miRNA鑒定與定量,實現1-5 ng總RNA建庫,大大提高了有限起始量樣本的研究與未來臨床檢測運用。 

    5、質控嚴格

    從外泌體分離、RNA提取到建庫和測序,層層環節進行質控。

    6、專業的生物信息學分析

    華盈生物具有強大的生物信息學團隊,能夠滿足客戶對數據各類深入的分析要求。

    數據分析流程:

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    參考文獻:

    1.       Han Mingli,Hu Jianguo,Lu Pengwei et al. Exosome-transmitted miR-567 reverses trastuzumab resistance by inhibiting ATG5 in breast cancer.[J] .Cell Death Dis, 2020, 11: 43.

    2.       Hou Zuoxu,Qin Xinghua,Hu Yuanyuan et al. Longterm Exercise-Derived Exosomal miR-342-5p: A Novel Exerkine for Cardioprotection[J] .Circ. Res., 2019, 124: 1386-1400.

    3.       Zhang Jia-Tao,Qin Hao,Man Cheung Fiona Ka et al. Plasma extracellular vesicle microRNAs for pulmonary ground-glass nodules.[J] .J Extracell Vesicles, 2019, 8: 1663666.

    4.       Zhang Yalin,Kim Min Soo,Jia Baosen et al. Hypothalamic stem cells control ageing speed partly through exosomal miRNAs.[J] .Nature, 2017, 548(7665): 52-57.

    5.       Ying Wei,Riopel Matthew,Bandyopadhyay Gautam et al. Adipose Tissue Macrophage-Derived Exosomal miRNAs Can Modulate In Vivo and In Vitro Insulin Sensitivity.[J] .Cell, 2017, 171(2): 372-384.e12.

    6.       Zhang Lin,Zhang Siyuan,Yao Jun et al. Microenvironment-induced PTEN loss by exosomal microRNA primes brain metastasis outgrowth.[J] .Nature, 2015, 527: 100-104.