細胞因子檢測技術解答(FAQ)

華盈視角:細胞因子檢測常見問題解答(FAQ)

2020/08/03


1.固相芯片與液相芯片的區別?

①載體性質不同,固相芯片通過空間位置尋址來識別不同點陣元素(即區別不同的特異性反應),液相芯片則通過微球所具有的物理、光學信號(如大小或顏色)來識別點陣元素。固相芯片是在玻片表面反應,液相芯片技術在溶液中反應;

②檢測通量不同:固相芯片通量高是最大特點,一次實驗反應可檢測指標高達上千種;液相芯片一般一次實驗反應可檢測幾十種因子。

③樣本通量不同:一張芯片固相芯片可檢測2-16例,一張液相芯片檢測約80例樣本。

④固相芯片適合研究初期多種因子廣泛篩選項目,在樣本體積小,檢測指標多時應用。液相芯片更適合樣本數量多的多因子檢測項目。


2.想做細胞因子的篩查,標本用血清還是血漿好?

血清血漿都是比較常用的樣本類型,都可以用來檢測細胞因子。但需要注意溶血樣本可能會對細胞因子的檢測結果產生一定影響。

沒有一種最佳的樣品制備方法明顯優于所有分析物的測量。細胞因子的檢測效果取決于樣本收集和處理的方法以及檢測技術的檢測靈敏度。

參考文獻:Biancotto A , Feng X , Langweiler M , et al. Effect of anticoagulants on multiplexed measurement of cytokine/chemokines in healthy subjects.[J]. Cytokine, 2012, 60(2):438-446.


3.血清可以用普通離心管收全血,4℃過夜,自然凝固分層獲得,可以用液相芯片檢測細胞因子嗎?

血清要用專門的促凝管收集,室溫(22~25℃)放置30~60 分鐘,血液標本自行凝結后,用移液器吸取上層血清。促凝管內壁是處理過的,不易吸附上血細胞,而普通的管子可能會有一些血細胞附壁,對檢測產生噪音。

4.樣本凍存在-80℃冰箱幾年,這樣的標本檢測細胞因子是否能檢測出來呢?

樣本置于-80℃保存,樣本沒有經過反復凍融對大多數細胞因子的檢出影響不大,但是在樣本中本身表達量非常低的因子會有一定的影響,建議客戶拿少量幾個代表性的樣品先用液相芯片做預實驗評估一下,再開展大規模檢測。

5.ELISA試劑盒說明書中未標明適用于組織樣品的檢測,是否能用于檢測組織樣品?

組織樣本本身存在多元性比較強,樣本的表達差異大,無法統一,因此說明書一般沒有明確的建議稀釋倍數,建議客戶做預實驗摸索稀釋倍數,或經驗決定。


6.液相芯片可以定制嗎?客戶感興趣的指標可以全部在一張芯片上檢測嗎?

市面上已經有很多Luminex液相芯片成品,包含Cytokine、Chemokine、Growth Factor、 Angiogenesis等多種功能和類型的蛋白質。同時還可以選擇組合感興趣的指標訂制液相芯片,但并不是所有指標都可以放在一起檢測,為了提高準確性,將不存在交叉反應的微球放在一起,形成不同panel。

對于R&D,通過官網查詢是否可在同一panel中進行檢測;伯樂和millipore中同一成品panle中的指標可隨意搭配,但注意millipore特殊符號的含義,例如●表示僅適用于血清、血漿。


7.Luminex液相芯片檢測不到的指標,可以用ELISA進行檢測嗎?

液相懸浮芯片的特點是需要的樣品量少,同時檢測的指標多,為避免微球間的交叉反應,有些指標是不能同時在一個panel中檢的,這時候就需要用到ELISA進行補充,只要保證實驗組和對照組用相同的方法即可。同時,ELISA也是驗證luminex的一個經典技術。