Simoa技術解答(FAQ)

華盈視角:Simoa超靈敏蛋白質檢測技術解答(FAQ)

2020/08/03

1. Simoa主要優勢是什么?

①反應體系:最終免疫復合物將熒光信號鎖住在50飛升小孔中,減小信號擴散和交叉反應。

比傳統100μl的體系小了20億倍,此時即使一個的目的蛋白分子催化底物可以產生足夠的熒光分子被CCD成像系統進行數字化解讀;

②濃度的計算是經過數字化的計算,而不是傳統的ELISA的模擬算法;

③對于腦脊液、房水等的稀有樣本,可稀釋后進行檢測,例如腦脊液可稀釋100倍后檢測Nfl,節約樣品量。

2. Simoa每個試劑盒可以檢測多少樣本?

答:每個試劑盒可以做1張96孔板,其中標準品一般是S1-S8,參照品C1、C2。標準品與參照品2個重復檢測,還剩76個孔。因此可檢測76例樣品(單孔)或38例樣本(復孔)。

3. Simoa檢測的標記物幾倍稀釋,客戶需要提供多少樣品?

樣品需求量與客戶是否做重復有關。每個標志物需要的樣本體積和上樣量不一樣。

血清/血漿一般4-8倍稀釋,提供200ul可以滿足大部分標志物做2個重復,且有富余,如果客戶若有需求可以將樣本寄回;腦脊液要稀釋100倍,大約10ul可以滿足2重復檢測。

4. Sioma檢測的流程是什么?96孔板和光盤什么關系?

將準備好的樣本加到96孔板,推入到HD-1分析儀里面,設置好參數后,分析儀會從96孔板中吸取樣本,磁珠等試劑到孵育杯中(cuvette)反應。具體的,在孵育杯中,磁珠上偶聯的捕獲抗體與目的蛋白結合,接下來系統會洗滌磁珠以除去任何非特異性結合

的蛋白質。然后加入生物素標記的檢測抗體進行孵育,再加入親和素偶聯的酶和酶反應底物。 最后將免疫復合物轉移到simoa光盤(Disc)中,通過CCD成像系統進行數字化解讀。因此1張96孔板需要4張光盤。

5. Simoa光盤是什么樣的,為什么可以提高檢測靈敏度?

Simoa TM 光盤由Sony DADC采用尖端技術制造,是Simoa HD-1分析儀的核心部件。每張光盤包含24個芯片(Array),可檢測24個樣本。每個芯片約有238000個微孔(well),微孔體積約為50fL。每個微孔直徑4.5μm,深3.25μm,而磁珠直徑2.7μm,因此每個微孔只能容納一個磁珠??蓪晒庑盘栨i住在50飛升小孔中,減小信號擴散和交叉反應。

6. Simoa檢測技術目前應用在哪些領域?

Simoa在神經科學,腫瘤,炎癥反應,感染免疫,心血管疾病,藥效動力學和藥代動力學等多個領域已經獲得了大量成功的數據,并發表了一些列重要的文獻。

· 神經疾病研究:既往只能在腦脊液中檢測的神經標志物,利用 Simoa 技術可以在外周血中檢測到,改變了腦損傷和神經退行性疾病的診斷方式,包括應用包括阿爾茨海默病、帕金森病、亨廷頓病、外傷性腦損傷、腦震蕩等。

· 腫瘤領域:在腫瘤領域,通過檢出極低含量的腫瘤標志物,有助于癌癥的早期診斷和預后療效判斷。

· 炎癥領域:可以直接在血清或者血漿中檢測常規方法檢測不到的炎癥和抗炎分子的含量,疾病和健康人群中炎癥分子所扮演的角色將得到更進一步的研究。

· 心血管領域:超低水平檢測心臟生物標志物的能力有助于心臟健康的檢測。有助于早期對心臟生物標志物進行檢測。

7.simoa實驗的質控是什么?

質控評價有兩點,1、標準曲線的CV要滿足AEV%CV小于20%。表明兩重復良好。由于每個標品點的濃度是試劑盒上已知的,因此標品濃度不存在CV。試劑盒有兩個質控品,一個是低濃度的一個是高濃度的,質控品的濃度在說明說提供的檢測范圍內,表明試劑盒OK,質控過關。

8.Simoa實驗做血清樣本的話,個別溶血樣本會影響結果么?

對于血清或血漿的樣本要求是忌溶血,忌反復凍融。從我們已有經驗,做過食蟹猴的血漿樣本,個別輕度溶血的血漿,看上去淡粉色,可以獲得實驗結果,而且濃度上沒有明顯的異常。但是重度溶血的樣本很可能在檢測的時候,這個孔報錯,獲得不了濃度的風險。

9.Simoa實驗標曲的A點的%Error為NaA是怎么回事?

每次這個點都是這樣的,很正常,標曲的第一個點濃度為0,沒有一個回算的濃度,分母為0,沒有辦法計算百分比啊。

10.Simoa試劑盒的有效期一般多久?

從試劑盒到貨的有效期基本為半年以上,不到一年。